miRNA pull-down

miRNA pulldown是细胞水平研究miRNA与RNA（mRNA、lncRNA、circRNA）相互作用的重要实验技术。实验原理为人工合成生物素标记的目的miRNA片段，并转染到实验细胞内。生物素-miRNA在细胞中与靶向RNA结合（如mRNA、lncRNA和circRNA），裂解细胞后使用链霉亲和素偶联的磁珠进行捕获与富集，洗脱纯化后获得miRNA靶向RNA或关联的RNA结合蛋白（RBP），随后利用二代测序、qPCR或免疫印迹等方法，对目标RNA或RBP进行分析。

技术流程概述：

1、miRNA探针设计合成

根据目标miRNA序列，设计合成生物素标记的miRNA探针，与阴性对照探针；

2、转染

实验细胞培养至合适密度，分别转染生物素-miRNA探针与阴性对照探针，培养36-48h；

3、细胞裂解

收集细胞，裂解后加入DNase处理，去除基因组DNA的干扰；

4、Pull down

裂解物中加入链霉亲和素偶联的磁珠，混合孵育，捕获miRNA-RNA（蛋白质）复合物，其后通过离心或磁力架分离纯化；

5、洗脱与收集

洗脱琼脂糖微珠或磁珠，并收集实验miRNA靶向RNA及可能的RBP；

6、检测与分析

收集与目的RNA结合的蛋白质后通过WB或质谱进行检测分析与目的RNA结合的蛋白质。

结果展示

客户提供的材料与信息

1、目标miRNA信息、待验证的靶向RNA信息等；

2、细胞样本，细胞量不低于3×10^7个细胞；

3、组织样本不低于1g；

4、或实验方案设计。