蛋白质修饰位点鉴定

        在蛋白质修饰研究中，蛋白质上的修饰位点鉴定对于后续研究至关重要。蛋白质上的修饰位点鉴定具体流程如下。

技术流程概述：

1、生物信息学分析蛋白质上的修饰位点或质谱检测蛋白质上的修饰位点

利用生物信息学分析蛋白质上的修饰位点（详见“如何预测蛋白质磷酸化位点”，“如何预测蛋白质甲基化位点”，“如何预测蛋白质泛素化位点”，“如何预测蛋白质SUMO化位点”，“如何预测蛋白质乳酸化位点”和“如何预测蛋白质琥珀酰化位点”等）或利用质谱检测蛋白质上的修饰位点。

2、构建修饰位点突变蛋白质表达载体

通过步骤1分析/检测获取潜在修饰位点后，把编码靶蛋白质的CDS序列克隆到含标签的表达载体，随后通过点突变构建修饰位点突变蛋白质表达载体。

3、转染修饰位点突变蛋白质表达载体到细胞

利用转染试剂把含标签的修饰位点突变蛋白质表达载体转染到细胞中。

4、检测蛋白质修饰

转染后利用标签抗体和特异性检测蛋白质修饰抗体（如丙酮酰化赖氨酸抗体）开展免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation，Co-IP）/邻位连接技术（Proximity Ligation Assay，PLA）检测蛋白质修饰。

5、确定蛋白质上的修饰位点

通过消失或减弱的信号确定蛋白质上的修饰位点。

技术流程图：

客户提供的材料与信息：

1、靶蛋白质与蛋白质修饰的信息；

2、细胞系信息。