Ψ-RIP技术服务

       假尿嘧啶化RNA免疫共沉淀（Ψ RNA immunoprecipitation，Ψ-RIP）是研究RNA假尿嘧啶化修饰的实验技术。其实验原理为使用抗假尿嘧啶抗体特异识别假尿嘧啶化RNA，形成抗体-RNA复合物，通过与免疫共沉淀相似的方法，使用琼脂糖微珠或磁珠捕获并富集抗体-RNA复合物，洗脱后利用qPCR或高通量测序分析获取的RNA。

技术流程概述：

1、细胞裂解与RNA提取

组织先裂解重悬为单细胞悬液；裂解培养细胞或者组织细胞悬液，提取总RNA，并用DNA酶消化内源性DNA，降低干扰。

2、RNA质检与定量

3、RNA片段化

使用超声处理RNA样品，RNA打断为约平均100nt的片段。

4、免疫沉淀

使用抗假尿嘧啶抗体特异识别假尿嘧啶化RNA，再以Protein A、Protein G 或Protein A/G的琼脂糖微珠或磁珠捕获抗体获取目的抗体-RNA复合体，通过离心或磁力架分离纯化目的抗体-RNA复合物。

5、收集与RNA重抽提

利用洗涤液清洗收集的微珠/磁珠抗体-RNA复合物，其后加入蛋白酶K消化，释放RNA；使用提取试剂，重新抽提RNA。

6、分析检测

通过qPCR或高通量测序检测分析获得的RNA。

结果展示：

客户提供的材料与信息：

1、目标RNA信息；

2、细胞样本，细胞量不低于3×10^7个细胞；

3、组织样本不低于1g；

4、或实验方案设计。